Inmunoelectroforesis como Herramienta para la Caracterizacion de Proteinas en un Extracto Vegetal.
El Jacaratia dodecaphylla es un árbol del dosel de la selva Altoparanaense de la familia de las Caricáceas, cuyo fruto aun siendo más pequeño se asemeja al fruto de Carica papaya. En el látex del fruto se ha determinado la presencia de tres enzimas proteolíticas cuyos pesos moleculares calculados por SDS – PAGE son 23.000D, 26.000D y 29.500D. El parecido de estos pesos moleculares con los de la papaína y la quimopapaína (23.429D para la papaína y 23.650D para la quimopapaína. Barret, Rawlings y Woessner, Handbook of Proteolytic Enzymes, 1998) y a fin de comprobar la similitud aparente entre estas proteínas se comenzó un experimento de inmunoelectroforesis para el cual se utilizaron conejos albinos a fin de producir anticuerpos contra la mezcla de proteínas del látex del fruto.
El antígeno se administró a los conejos emulsionado con el adyuvante de Freund en dos dosis separadas por 28 días. Los conejos fueron sangrados a los 45 días utilizando el suero obtenido como solución de anticuerpos policlonales. La inmunoelectroforesis se llevó a cabo en geles de agarosa al 1% en cuya preparación se adicionaron los anticuerpos, sembrándose en los pocillos del gel diluciones seriadas de papaína y quimopapaína de origen comercial (Sigma), la electroforesis se efectuó en un sistema submarino, con buffer barbital sódico, 0,05 M, pH 8,6.
Los dibujos en forma de cohete que resultaron de la reacción de precipitación antígeno – anticuerpo fueron positivos tanto para la papaína como para la quimopapaína indicando la presencia en el gel de anticuerpos producidos por enzimas con un grado de similitud importante con la papaína y la quimopapaína.
